登陆注册
8918600000014

第14章 糖类药物(2)

肝素在α‐球蛋白参与下,能抑制凝血酶原转变成凝血酶,阻止血液的凝结过程,用于防止血栓的形成。肝素还具有澄清血浆脂质,降低血胆固醇和增强抗癌药物等作用。临床广泛用作各种外科手术前后防止血栓形成和栓塞,输血时预防血液凝固和作为保存新鲜血液的抗凝剂。

肝素广泛分布于哺乳动物的肝、心、脾、肾、胸腺、肠黏膜、肌肉和血液里。因此肝素可由猪肠黏膜、牛肺提取。其生产工艺主要有盐解—季铵盐沉淀法,盐解—离子交换法和酶解‐离子交换法。肝素在组织内和其他黏多糖一起与蛋白质结合成复合物,因此肝素制备过程包括肝素蛋白质复合物提取、解离和肝素的分离纯化两个步骤。

(1)提取

新鲜肠黏膜投入反应锅内,按3%加入NaCl,用30%NaOH调pH9.0,于53~55℃保温提取2h。继续升温至95℃,维持10min,冷却至50℃以下,过滤,收集滤液。

(2)阴离子树脂吸附

加入714强碱性Cl‐型树脂,树脂用量为提取液的2%。搅拌吸附8h,静置过夜。收集树脂,用水冲洗至洗液澄清,滤干。用2倍量1.4mol/LNaCl搅拌2h,滤干。用2倍量3mol/LNaCl搅拌洗脱8h,滤干,再用1倍量3mol/LNaCl搅拌洗脱2h,滤干。

(3)沉淀

合并滤液,加入等量95%乙醇沉淀过夜。收集沉淀,丙酮脱水,真空干燥得粗品。

(4)精制

粗品肝素溶于15倍量1%NaCl,用6mol/L盐酸调pH1.5左右,过滤至清,随即用5mol/LNaOH调pH1.0,按3%量加入H2O2(H2O2浓度30%),25℃放置,维持pH1.0。第二天再按1%量加入H2O2,调整pH1.0,继续放置48h。用6mol/L盐酸调pH6.5,加入等量的95%乙醇,沉淀过夜。收集沉淀,经丙酮脱水真空干燥,即得肝素钠精品。

6.2.2发酵法

6.2.2.1概述

利用微生物发酵也是很早被人类发现并应用于生产实践的,如甘露醇和1,6‐二磷酸果糖都可以用微生物发酵法生产。随着技术的发展,细胞固定化技术也应用到微生物发酵产糖上面,如1,6‐二磷酸果糖就可采用固定化酵母细胞发酵法。

6.2.2.2D‐甘露醇生产举例

甘露醇又称己六醇,是由甘露糖或果糖衍生而成的糖醇。甘露醇在体内代谢甚少,肾小管内重吸收也极微,静脉注射后,可吸收水分进入血液中,降低颅内压,使由脑水肿引起休克的病人神志清醒;还可用于大面积烧伤及烫伤产生的水肿,并有利尿作用,用以防止肾脏衰竭,降低眼内压,治疗急性青光眼;还用于中毒性肺炎、循环虚脱症等。

(1)菌种活化

米曲霉菌3.409菌种接种于10ml斜面培养基中,31℃,培养4天。斜面存于4℃冰箱中,2~3个月传代一次。使用前重新转接活化培养。培养基的制备:取麦芽1kg,加水4.5L,于55℃保温1h,升温到62℃,再保温5~6h,加温煮沸后,用碘液检查糖化度应在12°Be′以上,pH5.1以上,即可存于冷室备用,取此麦芽汁加2.1%琼脂,灭菌后、冷冻制成斜面,存于4℃备用。

(2)种子培养

取经活化培养4天的斜面菌种2支,转接于17.5L种子培养液中,31±1℃搅拌通气培养20~24h。通气量为1∶0.5V/V·min,搅拌速度350rpm,罐压1kg/cm。种子培养基:NaNO30.3%,KH2PO40.1%,MgSO40.05%,KCl0.05%,FeSO40.001%,玉米浆0.5%,淀粉糖化液2%,玉米粉2%,pH6~7。

(3)发酵

于500L发酵罐中,加入350L发酵培养基,1.5kg/cm蒸汽灭菌30min,移入种子培养液,接种量5%,30~32℃发酵4~5天,通气量1∶0.3V/V·min,发酵20h后改为1∶0.4,罐压1kg/cm,搅拌速度230rpm,配料时添加适量豆油,防止产生泡沫。发酵培养基与种子培养基相同。

(4)除杂质、分离结晶

发酵液加热100℃,5min凝固蛋白,加入1%活性炭,80~85℃加热30min,离心,澄清滤液于55~60℃真空浓缩至31°Be′,于室温结晶24h,甩干得甘露醇结晶。将结晶溶于0.7体积水中,加2%活性炭,70℃加热30min,过滤。清液通过717强碱型阴离子树脂与732强酸性阳离子树脂,检查流出液应无氯离子存在。

(5)浓缩、结晶、烘干

精制液于55~60℃真空浓缩至25°Be′,浓缩液于室温结晶24h,甩干结晶,置105~110℃烘干,粉碎包装。

6.2.3酶转化法

酶转化法也用在了某些糖类药物的生产,如1,6‐二磷酸果糖(FDP)。以1,6‐二磷酸果糖的生产为例介绍酶转化法。

1,6‐二磷酸果糖是果糖的1,6‐二磷酸脂,其分子形式为游离酸FDPH4与钠盐,如1,6‐二磷酸果糖三钠盐(FDPNa3H)等。

1,6‐二磷酸果糖是葡萄糖代谢过程中的重要中间产物,是分子水平上的代谢调节剂。

FDP具有促进细胞内高能基团的重建,保持红细胞的韧性及向组织释放氧气的能力,是糖代谢的重要促进剂。临床验证表明FDP是急性心肌梗塞、心功能不全、冠心病、心肌缺血发作、休克等症的急救药物,它有利于改善心力衰竭、肝肾功能衰竭等临床危象,在各类外科手术中可以作为重要辅助治疗药物,对各类肝炎引起的深度黄疸、转氨酶升高及低白蛋白血症者也有较好的治疗作用。

6.2.3.1生产1,6‐二磷酸果糖的工艺路线

6.2.3.2工艺过程

取经多代发酵应用过的酵母渣,悬浮于适量蒸馏水中,反复冻融3次,加入底物(8%蔗糖,4%NaH2PO4,30mmol/LMgCl2)调pH6.5,于30℃,反应6h。煮沸5min,离心去除杂蛋白,收集清液。转化液通过DEAE‐C交换柱(阴离子交换柱),用蒸馏水洗至pH7.0,然后进行分步洗脱,转成钙盐,过滤,收集沉淀。将FDPCa悬浮于水中,用732—[H]树脂将其转化成FDPH4,用2mol/LNaOH调pH5.3~5.8,除菌过滤后,冻干。

【合作讨论】

课前讨论

1.什么是糖生物学?

2.你知道的多糖类药物有哪些?分别用来治疗什么病?

3.你怎么评价市场上出现的甲壳素抗菌衬衫?

课后讨论

1.什么是黏多糖,其特点是什么?

2.多糖的提取和纯化方法有哪些?各种方法的适用范围如何?

3.全面介绍一种多糖的生产方法及过程。

4.甲壳素的研究开发现状。

5.设计一个从羊栖菜中提取多糖的方案。

【复习思考题】

1.简述糖类药物的生产方法及其特点。

2.画出肝素的盐解—离子交换法提取工艺流程,并说明其工艺控制要点。

3.简述1,6‐二磷酸果糖的工艺流程及控制要点。

同类推荐
  • 医说孙子兵法

    医说孙子兵法

    本书从一个医生和医院管理者的角度来解读兵学名著,令人耳目一新,对临床医学、医院管理和医学教学科研有一定裨益。战略思想不仅受到军事战略家的重视,现已扩展到包括医学在内的其他领域。从指导思想、行动准则和理念上来看,医学与兵学有许多共同之处。防病如防敌,“圣人不治已病治未病”、“上医治未病之病”、“良医者,常治无病之病,故无病”的思想与孙子“故用兵之法,无恃其不来,恃吾有以待也”的理念是一致的。
  • 千金方

    千金方

    《千金方》是综合性临床医著。又称《千金要方》,简称《千金方》。22卷。明代后有按《道藏》经义析为93卷者,内容同。唐代孙思邈约撰于652年。是感于当时的方药本草部秩浩繁,仓卒间求检不易,乃博采群经,删繁去复,并结合个人经验而撰成 。卷 1医学总论及本草、制药等;卷2~4妇科病;卷5儿科病;卷6七窍病;卷7~10诸风、脚气、伤寒;卷11 ~20系按脏腑顺序排列的一些内科杂病;卷21消渴、淋闭等症 ;卷22疔肿痈疽。总计162门,合方论4500首。书中所载医论、医方较系统地总结了自《内经》以后至唐初的医学成就,是一部科学价值较高的著作。
  • 医心方

    医心方

    《医心方》是日本的国宝,是中日医学交流史上的一座丰碑。撰者丹波康赖(912-995)系东汉灵帝之后入籍日本的阿留王的八世孙,他医术精湛,被赐姓丹波,累迁针博士、左卫门佐。他于公元984年撰成《医心方》30卷,这是日本现存最早的医书,成为后来宫庭医学的秘典,奠定了医家丹波氏不可动摇的历史地位。该书荟集中国医学典籍达204种,其中大半在中国亡佚,集当时日本汉医之大成,内容广及医学的各个领域,乃至于养生、房中(性医学),后者则导致它在中国大陆被视为准禁书达几十年。
  • 中医十大类方

    中医十大类方

    《中医十大类方(第3版)》对有代表性的十大类共104首中医方剂的方证、临床应用范围等实用知识作了解说。全书以药类方,以方名证,贯穿“药证相应、方证相应”的解说原则,内容贴近临床,通俗实用,文字亦浅显。《中医十大类方(第3版)》适合于中医药爱好者、西医学习中医人员、中医院校的学生及中医临床工作者参考阅读。
  • 名方妙用

    名方妙用

    本书作者在长期临床实践中,广泛收集古今中医药方,经长期临床验证,精心筛选出制作简单、取材容易、疗效确切的药方1200余首。每方包括组成、加减、主治和疗效。按常见证候和内科、儿科、妇科、外科、皮肤科、眼科、耳鼻咽喉科等分类编排,介绍了250余种常见病和部分疑难病症的中药名方治疗。本书内容丰富,资料翔实,实用性强,适于临床各科医生,特别是基层医务人员及家庭自疗者阅读参考。
热门推荐
  • 口才高手(现代生活实用丛书)

    口才高手(现代生活实用丛书)

    在这个提倡终身学习,不断进步的时代,命运是掌握在自己的手中的,你如何实现自己的使命呢?那么,怎样营选良好的人际关系?怎样才能得到身边人的敬爱和尊重呢?本书或许对你有所帮助。
  • 鸳鸯错配之后宫深渊

    鸳鸯错配之后宫深渊

    三个女子被越狱犯追到悬崖,被迫无奈跳了下去,进行离奇的三人穿越。在这个历史上没出现过的国度,这个可怕的后宫深渊,她该怎么坚持下去?她的处境不能做到与君愿得一心人白首不相离,只愿一首《鸳鸯配》让君回眸。
  • 丹器大帝

    丹器大帝

    一次意外,商焱获得了不平凡的能力,同时觉醒了厄难之体,获丹仙传承,机缘无数,却不断给身边的人带来灾难...
  • 冠绝天下:邪王独宠傲娇小狂妃

    冠绝天下:邪王独宠傲娇小狂妃

    一朝穿越,她本是21世纪医毒药三绝金牌杀手却变成金冥国凌国公府废材五小姐凌冷幽,强魂注入,说她是废材,瞎了你的钛合金狗眼,逆天灵根,驭神兽,修神诀,逆天修灵空间,成玄神,脚踩白莲花,lue渣渣,身后还有某尊妖孽大神,扮猪吃老虎,高级腹黑,装做柔弱病态王爷,双重身份保护,宠溺无限,和幽一起傲视天下...
  • 蓝田暮歌

    蓝田暮歌

    这里有无穷无尽的灵力,有无数的秘密,有人类,有妖魔,有宗门,有世家,有历史,有传奇……这里是蓝田大陆。
  • 剑与乱世

    剑与乱世

    一名平平庸庸的高中生范剑,从小对历史情有独钟,经常幻想自己有一日可以穿梭时空,回到过去。终于有一天,G市第六研究所发布了一则试验者招聘启事:寻找志愿者测试最新研制完成的时空传送装置,结果在机缘巧合之下,范剑成为了最终唯一的入围者,并成功又意外地回到了隋朝末年,开展了一段奇幻的冒险之旅。,
  • 玉楼剑影录

    玉楼剑影录

    一代高人?仙人?确也只是凡人。逍遥自在,一切随缘。无女主,不后宫,不种马,请大家多多支持!
  • 平凡的大学

    平凡的大学

    写部小说,《平凡的大学》,或许算不得小说,只能算得上是一幕幕生活白描。本科期间,越来越倾向于高效、快速,然后短暂享受成果,在开始新的一轮。越来越没有耐心,去做一个长的项目,去坚持一个习惯,去培养一些耐心,尽管心里清楚,这样快餐式的“成功”,带来的终将是失败。但愿若干年后看到,可以想起曾经的日子。文笔很差,希望大家多多包涵。
  • 寒流新生

    寒流新生

    主人公寒流在异世大陆遭遇迫害,穿越至现在同样名为寒流的初中生身上................
  • 花魔的日记

    花魔的日记

    每个人都有自己的梦想,有的人梦想做人生的大赢家;无论在职场,商场,情场上都能应付自如,打造出属于自己的一片天地。有的人梦想做一个金钱上富有的人,能够潇洒来去。而我也不例外,我梦想有一天能去异界冒险,穿梭在那些奇幻诡异的世界里,见识那些魔界的生物会有怎样的生活,在他们的生活中又会有何种危险,又会有怎样的冒险与挑战-----