登陆注册
6035600000022

第22章 一探究竟——常见的组织细胞培养方法

体内组织细胞在体外培养时,所需的培养环境基本类似,但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同,各自的要求条件有一定的差别,所采取的培养技术措施亦不尽相同,下面简单介绍一下个别组织细胞培养的要点。

1.上皮细胞培养

上皮细胞包括腺上皮,是很多器官(如肝、胰、乳腺等)的功能成分,又由于癌细胞起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中经常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度比上皮细胞还要快,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此,纯化和延长生存时间是培养的关键。

体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜中,因此,培养在有胶原的底物上可能利于生长。另外,人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层(用射线照射后)时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低PH值、钙离子含量和温度、向培养基中加入表皮生长因子,均有利于表皮细胞的生长。

以表皮细胞为例,用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞,方法如下:

(1)取材:外科植皮手术残余的皮肤小块或早产、流产儿的皮肤,取比较薄的角化层,切成0.5~1平方厘米的小块。

(2)置0.02%的EDTA中,室温环境下5分钟。

(3)换入0.25%胰蛋白酶中,温度保持在4℃。

(4)分离:取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。

(5)取出表皮,剪成更小的块后,置于0.25%的胰酶中,37℃的环境下,30~60分钟。

(6)反复吹打,制成悬液。

(7)培养:用80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清。

(8)直接加入培养基制成细胞悬液,接种入培养瓶,CO2温箱培养。

2.内皮细胞培养

内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞,对于研究内皮细胞再生、肿瘤、促血管生长因子等有很大价值。

人的脐带是胎儿和母亲相连的部分。通过脐带,胎儿获得生活所必须的营养物质和氧气。脐带在医学上非常有用。有些父母热衷于把新生儿的脐带血保存起来,可以治疗很多的疾病,比如白血病,恶性肿瘤等等。研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便,方法如下:

(1)产后新鲜脐带,无菌剪取10~15厘米长的一段,如不能立即培养,可于12小时内保存于4℃的环境下。

(2)用三通注射器吸取温PBS液注入脐静脉中洗去残血,在入口处用线绳扎紧,以防液体返流。

(3)用血管钳夹紧脐带一端,从另一端向脐静脉中缓慢地注入浓度为0.1%的粗制胶原酶,充满血管,消化3~10分钟;注入口用线绳扎,以防液体返流。

(4)吸出含有内皮细胞的消化液,放在离心管中,注入温PBS轻轻反复冲洗后,一并注入离心管中(此步骤可重复)。

(5)离心去上清,加入RPMI1640培养液制成细胞悬液,接种入培养器皿中,置温箱培养。两至三天就能发现细胞长成单层。

3.神经细胞培养

神经是人体的指挥中枢,是最复杂也是最神秘的器官之一。神经细胞(神经元)不易培养,只有在适宜情况下,如接种在胶原底层上,或加入神经生长因子和胶质细胞因子时,可出现一定程度的分化,长出突起等现象,但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养,不仅能获得生长的胶质细胞,也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来,胶质细胞在培养中生长不稳定,不易自发转化,但对外界因素仍保持很好的敏感性,可用ROUS病毒和SV4等诱发转化。

同类推荐
  • 万物由来之谜

    万物由来之谜

    本套书主要介绍古今中外关于人类诸多未解的社会、自然现象,包括《中国自然遗产之谜》、《星球宇宙之谜》、《巨兽异兽之谜》等20个分册。
  • 驭海史话:人海和谐共生之路

    驭海史话:人海和谐共生之路

    《驭海史话:人海和谐共生之路》讲述了人类行为海洋中数以万计的居民的生活环境造成的冲击与影响。书中研究了人类与海洋过去和现在的联系,主要阐述了人类对海洋生命及栖息地造成的负面影响。其中包括大气和海洋的污染以及商业性的捕鱼等,导致濒临灭绝的海洋生物种类不断增加,使得巨大的海洋资源被人为的破坏。书中呼吁人类与海洋应该健康和谐地共处,保护这个看似强大实则脆弱的海洋生态。
  • 航海常识速读(速读直通车)

    航海常识速读(速读直通车)

    航海史是人类历史史册上的一宏伟篇章,从木船的制造到帆船的出现,以及之后大型油轮,舰艇、航空母舰等民商用船和军用船舶的发展,人类对于海洋的认识的增加以及航线的不断拉长,促进了世界各国经济文化交流,和人类文明的进步。让我们沿着时间的轨迹和航海家们的足迹来遨游广阔的海洋,了解发生在浩渺大海中的那些点滴过往!
  • 有趣的化学

    有趣的化学

    在化学世界中,充满了无限的神奇,可以说化学和人类的生存息息相关,需要我们去探索、去认知。
  • 中外帝王未解之谜

    中外帝王未解之谜

    帝王们的性情、脾气、性格、才华、手腕也是形形色色、丰富多彩的,有明君、暴君、昏君、庸君……他们的兴趣、爱好更是五花八门、光怪陆离,有喜欢做和尚的君主,有喜欢当木匠的皇帝,有喜欢吟诗作赋的皇帝,有喜欢书法绘画的皇帝,当然也有以杀人、折磨人为乐的帝王……他们之中有可恨、可耻之人,也有可爱、可怜之人,当然他们也是神秘不可莫测之人。
热门推荐
  • 幻世当空

    幻世当空

    幻世当空,遗世独立.,天地不仁,以万物为刍狗。吾以一缕元神轮回,待得缘起之时,定要踏碎凌霄……
  • 神奇的二次元大冒险

    神奇的二次元大冒险

    一天在一个名叫真·小说交流群的群里,一群人东一榔头西一棒子的聊着。突然,一位名叫X的人加了群,并爆出了一个惊人的消息。。。。。。。
  • 女王复仇史:鳳宮劫

    女王复仇史:鳳宮劫

    【日更八章以上】十年前,宝相国女帝战死。不久,民间流传宝相国有一国宝,得此国宝者,就能统一中原大地。十年后,宝相国灭亡,夏王朝建立,国号庄严。随着夏国的逐渐繁荣那个曾让各诸侯国为之疯狂的国宝也逐渐被人们所淡忘,只是,那个国宝倒底是什么呢?夏国鳳宫里的离奇事件,九子之争,七子为辅,那个幕后翻手为云覆手为雨的人,她来自何处?入这鳳宫里的真正目的又是什么?谁才是这鳳宫里真正的凤凰?谁又是统一这华夏之人?他说:“如果,没有那些事,你还会在爱我吗?”她说:“再来一次,我依然如此,因为,这是我生来的使命。”
  • 火澜

    火澜

    当一个现代杀手之王穿越到这个世界。是隐匿,还是崛起。一场血雨腥风的传奇被她改写。一条无上的强者之路被她踏破。修斗气,炼元丹,收兽宠,化神器,大闹皇宫,炸毁学院,打死院长,秒杀狗男女,震惊大陆。无止尽的契约能力,上古神兽,千年魔兽,纷纷前来抱大腿,惊傻世人。她说:在我眼里没有好坏之分,只有强弱之分,只要你能打败我,这世间所有都是你的,打不败我,就从这世间永远消失。她狂,她傲,她的目标只有一个,就是凌驾这世间一切之上。三国皇帝,魔界妖王,冥界之主,仙界至尊。到底谁才是陪着她走到最后的那个?他说:上天入地,我会陪着你,你活着,有我,你死,也一定有我。本文一对一,男强女强,强强联手,不喜勿入。
  • 蚀骨霸爱99次:老公,我们不约

    蚀骨霸爱99次:老公,我们不约

    彼此相爱却彼此折磨,无情背叛,反复报复。在爱的道路上越走越远…
  • 重生之末日神话

    重生之末日神话

    完结-----------------------------------
  • 疯狂抽奖系统

    疯狂抽奖系统

    一次濒死奇遇,带来了改变秦军一生的抽奖系统。无论是丹药、神通、血脉、武学、仙法还是符咒、阵法、秘术……无所不有,运气不好抽不到!系统商店积分兑换!系统商店太贵!下副本做任务自己找!无所不有的系统将会塑造出怎样的奇幻人生……
  • 白谷集

    白谷集

    本书为公版书,为不受著作权法限制的作家、艺术家及其它人士发布的作品,供广大读者阅读交流。
  • 泪落风途

    泪落风途

    一部摧人泪下的爱情故事,一段感人至深的生死恋情,在迷雾重重中,谁是谁的前世与今生。请看心碎一地的爱情小说《泪落风途》
  • 晴兰一梦

    晴兰一梦

    他,站在颓废的最边缘,不愿面对她的离去。她,用自己的努力感化了他心中的冰雪。前世今生,无论经历多少个轮回,他和她,终究是错过,还是重逢……