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第71章 结缔组织实验要点

“目的和要求”

1.掌握疏松结缔组织、透明软骨、骨组织、血细胞光镜下的结构特点。

2.了解致密结缔组织、脂肪组织、网状组织、纤维软骨、弹性软骨光镜下的结构特点。

3.了解长骨发生的特点。

4.了解网织红细胞的结构特点。

5.了解血细胞超微结构特点。

(一)疏松结缔组织铺片

标本大鼠腹腔活体注射台盼蓝,数日后取材,铺片,特殊染色。

观察

低倍镜铺片较厚,选取较薄部位观察,可见纤维交织成网,细胞散在于纤维之间。还可见毛细血管,内有红细胞。

高倍镜可分辨两种纤维和两种细胞。

(1)巨噬细胞胞体圆、卵圆或不规则形;细胞核小、圆;胞质丰富,充满吞噬的大小不等、分布不均的台盼蓝颗粒。

(2)肥大细胞体积较大,圆或卵圆形,常成群聚集于小血管旁;胞质内充满粗大均匀的异染性颗粒,呈紫蓝色;胞核小而圆,着色浅。

(3)胶原纤维数量多,粗细不等,有分支,交织排列,染粉红色。

(4)弹性纤维数量较少,多单根走行,较细,直行,有分支,断端常弯曲,呈棕色,折光性强。

(二)不规则致密结缔组织和脂肪组织

标本人皮肤石蜡切片,HE染色。

观察

肉眼染色深的一侧表面是表皮,其下方粉红色的部分是真皮和皮下组织。

低倍镜真皮内有大量的胶原纤维,呈粉红色,相互交织成网。在切片深部可找到脂肪组织,脂肪细胞体积大,呈空泡状,圆或多边性,聚集成群,被疏松结缔组织分割成许多脂肪小叶。

高倍镜

(1)不规则致密结缔组织胶原纤维之间散布有成纤维细胞和纤维细胞,细胞轮廓不清。成纤维细胞核较大,卵圆形,着色浅;纤维细胞核小,梭形,染色深。

(2)脂肪组织脂肪细胞体积较大,脂滴被溶解,胞体呈空泡状;因脂滴挤压,核偏于一侧,扁圆形,胞质少,仅于细胞周缘呈一薄层。

(三)规则致密结缔组织

标本肌腱纵、横切面,HE染色。

观察

肉眼粉红色长条状组织是纵切面,圆形是横切面。

纵切面:低倍镜下大量胶原纤维密集排列成束,染粉红色,束间有腱细胞。高倍镜下见,腱细胞核呈长椭圆形,染色深,胞质不明显。

横切面:低倍镜下可见粗细不一的胶原纤维束横切面,束间有腱细胞。高倍镜下见,腱细胞呈星形,核圆形,胞质弱嗜碱性。

(四)网状组织

标本淋巴结,镀银染色。

观察

肉眼淋巴结呈棕黑色椭圆形,找到着色浅的部位观察网状组织。

低倍镜找到组织结构疏松,染色浅的部位,可见网状纤维呈黑色,较细,分支多,粗细不等,交错成网。

高倍镜网状细胞附于网状纤维上,星形多突起,核较大,核仁明显,胞质着色浅。

(五)透明软骨

标本气管横切面,HE染色。

观察

肉眼气管壁中染成紫蓝色的半环形结构即透明软骨。

低倍镜自软骨的表面向中央依次观察。

(1)软骨膜软骨周边部薄层致密结缔组织膜,染粉红色,与周边结缔组织相延续,界限不清。

(2)软骨组织可见均质、灰蓝色的软骨基质,其中有单个或成群的软骨细胞。

高倍镜

(1)软骨膜在胶原纤维之间有一些卵圆或梭形的细胞核,胞质不易分辨;在软骨膜浅部多为纤维细胞,深部多为骨原细胞,两者不易区分。

(2)软骨细胞靠近软骨膜的软骨细胞较小,扁圆形,常单个分布。软骨中央的细胞较大,为圆或椭圆形,数个细胞成群分布,为同源细胞群。软骨细胞核较小而圆,核仁明显,胞质少,弱嗜碱性,可有空泡。软骨细胞所在的腔隙是软骨陷窝,软骨陷窝周围的软骨基质嗜碱性强,称软骨囊。制片时,细胞收缩,呈不规则形,软骨细胞与软骨囊之间出现空隙。软骨基质中,因胶原原纤维的折光性与软骨基质的折光性相同,故无法辨认。

(六)纤维软骨

标本椎间盘,石蜡切片,HE染色。

观察

肉眼切片周围染成粉色的是纤维软骨构成的软骨环,中央染为蓝色的是髓核。

镜下胶原纤维束以髓核为中心环形走行,纤维间有少量的软骨基质和数量不等的软骨细胞,软骨囊不明显。

(七)弹性软骨

标本耳郭,石蜡切片,弹性染色。

观察

肉眼周边染色浅的部分为皮肤,中央染为紫色的部分为弹性软骨。

镜下软骨细胞较密集,软骨基质中有紫蓝色的弹性纤维,纤维交织成网。

(八)密质骨

标本长骨骨干横切片或磨片,硫堇或大荔紫染色。

观察

肉眼切面呈扇形,光滑的弧形一侧为外环骨板,相对的一侧不规则,为内环骨板。

低倍镜

(1)外环骨板较厚,位于骨的外表面,为较整齐、平行排列的数层或十数层环形骨板。

(2)内环骨板面向骨髓腔,较薄,为数层不规则的骨板。

(3)骨单位又称哈弗斯系统,位于内、外环骨板之间,由中央管及其周围4—20层同心圆排列的哈弗斯骨板构成,切面呈圆、卵圆或不规则形。

(4)间骨板位于骨单位之间或骨单位与内、外环骨板之间,为一些大小不一、形状不规则的平行骨板。

标本中的纵切或斜切的管道,较粗,即穿通管,可与中央管相通。

高倍镜

(1)骨陷窝位于骨板之间或骨板内,椭圆形,为骨细胞胞体所在部位的腔隙。

(2)骨小管是从骨陷窝向四周发出的许多细小管道,为骨细胞突起所在的腔隙,相邻骨陷窝之间的骨小管彼此相通。最内侧的骨小管与中央管相同。在骨单位的表面,有折光性较强的粘合线,骨单位最外周的骨小管在此返折,不与相邻的骨单位的骨小管相通。

(九)长骨发生

标本胎儿手指骨纵切面,石蜡包埋,HE染色。

观察

肉眼切片呈长条形,膨大端为骨骺,缩窄部分为骨干,两者间染色深蓝的部分是骺板软骨。

低倍镜自骺端向骨干的骨髓腔方向依次观察骺板软骨。

软骨储备区:是透明软骨组织,软骨细胞小而分散,软骨基质弱嗜碱性。

软骨增生区:软骨细胞增大,呈扁平形;一个同源细胞群的软骨细胞形成一条纵形的细胞柱。

软骨钙化区:软骨细胞肥大变圆;近骨髓腔的软骨细胞核固缩、死亡、消失;钙化的软骨基质强嗜碱性。

成骨区:在残留钙化的软骨基质表面,被覆薄层红色的新生骨组织,形成条索状过渡性骨小梁,其表面有成骨细胞,小梁间隙为骨髓腔,与骨干的骨髓腔相同,内有造血组织。

高倍镜

(1)成骨细胞位于过渡型骨小梁表面,立方形或矮柱状,核圆形,细胞质嗜碱性。

(2)破骨细胞散在于软骨钙化区的凹窝中或过渡性骨小梁的表面,胞体大而不规则,细胞核多,细胞质嗜酸性。

(十)血涂片

标本人末梢血液涂片,吉姆萨(Giemsa)染色。

观察

肉眼血涂片被染成粉红色薄膜,选较薄而均匀的部位镜下观察。

低倍镜视野中有大量圆形无核的红细胞,红细胞间散在有胞体较大、核染紫蓝色的白细胞。选择细胞分布均匀且白细胞较多的部位,换高倍镜仔细观察。

高倍镜

(1)红细胞数量最多,细胞较小,无核,周围染色深,中央色浅。

(2)白细胞移动标本,寻找各种白细胞进行观察。

中性粒细胞:数量较多,比红细胞大,圆形;胞核深染,呈弯曲腊肠状或分2—5叶,叶间有纤细的缩窄部相连;胞质呈粉红色,含有许多细小的紫红色颗粒。

嗜酸粒细胞:略大于中性粒细胞,核多为2叶,胞质内充满粗大、均匀、鲜红的嗜酸性颗粒。

嗜碱粒细胞:数量极少,不易找到。大小似中性粒细胞;胞核着色浅,呈S形或不规则形,常被颗粒覆盖而不明显;细胞质可见大小不等,分布不均,染成蓝紫色的嗜碱性颗粒。

淋巴细胞:数目较多,细胞大小不等,以小淋巴细胞为多。小淋巴细胞体积与红细胞相似,核圆,一侧常有小凹陷,染色质浓密成块状,着色深;细胞质少,嗜碱性较强,呈天蓝色。中淋巴细胞较中性粒细胞小,核染色质略稀疏,着色较浅;胞质较多,含少量嗜天青颗粒。

单核细胞:胞体最大,圆或卵圆形;核肾形、马蹄铁形或不规则形,染色质细而松散,染色较浅;细胞质丰富,灰蓝色,含较多细小的紫色嗜天青颗粒。

(3)血小板常成群分布于血细胞之间,是形状不规则的胞质小块,中央有细小的紫蓝色颗粒,为颗粒区;周边呈均质浅蓝色,为透明区。

(十一)网织红细胞

标本人末梢血液涂片,煌焦油蓝染色,Wright液(瑞氏液)复染。

观察低倍镜可见红细胞呈粉红色,寻找其中体积较大胞质内有深蓝色网状结构的红细胞,即网织红细胞。移至视野中心,换高倍镜观察,可见网织红细胞内有清楚的深蓝色的网状结构或颗粒。

(十二)血细胞的电镜结构

观察血细胞的电镜照片,了解各种血细胞的超微结构特点。

(张鑫)

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