“实验目的”掌握生理实验常用手术方法，为后续的动物实验奠定基础，培养学生动手能力。
“实验原理”生理学是一门实验性科学，生理学的知识主要是通过实验获得的。动物实验是生理学研究的主要方法，动物实验的成败，很大程度上取决于手术准备的过程。
“实验对象”家兔
“实验用品”哺乳类动物常用手术器械一套。
“实验准备和步骤”
1.
兔的麻醉与固定。动物称重后，按2ml/kg（15～20mg/kg）的剂量由兔耳缘静脉缓慢注入1.5%戊巴比妥钠（或用205氨基甲酸乙酯4～5ml/kg的剂量）将兔麻醉。注射过程中应注意观察动物的肌张力、呼吸、心跳、瞳孔大小、角膜反射等，以免麻醉过深。麻醉效果的判定以兔呼吸平稳深慢，角膜反射迟钝或消失，肢体肌肉松弛，皮肤夹捏反射消失等说明麻醉适宜。将麻醉好的动物背位固定于手术台上，头部用兔头固定夹固定（实验中常用棉线将兔的门牙固定于手术台上的柱子上），颈部必须放正拉平。麻醉完毕可用动脉夹将针头固定于耳缘静脉内，以方便实验过程中多次注射使用（为防止出血，可在针头内插一针灸用的毫针）。
2.颈部手术。
（1）
气管插管术：做皮肤切口之前，应先剪去颈部的毛，沿正中线作一5～10cm的切口，用止血钳沿纵向分离皮下组织和浅层肌肉，暴露出气管，分离气管并在气管下穿一条粗丝线，用手术剪在甲状软骨下约第三或第四环状软骨水平气管壁上作一倒“T”形切口，向心脏方向立即插入气管插管，并将线结扎固定在气管插管的分叉上以防滑脱。
（2）
分离颈部的主要血管和神经：用左手拇指和食指捏住切口侧的皮肤和肌肉，其余三指从皮肤外面略向上顶，便可暴露出与颈总动脉平行的神经束，该神经束内包含有迷走神经、交感神经和减压神经（降压神经）。先仔细辨认三条神经的走向和粗细，其中迷走神经最粗，减压神经最细（如毛发粗细），并常与交感神经紧贴在一起，交感神经比较细。在神经分离过程中，一般常先分离右侧颈部减压神经、其次交感神经和迷走神经，最后分离颈总动脉。颈总动脉和每条神经均分离2～3cm长，根据需要在它们下方穿线备用，然后顺序分离左侧神经和血管并穿线备用。左颈总动脉尽可能向远心端分离，因实验中常使用左颈总动脉插管测量血压，右侧神经作刺激用，左侧神经作为备用。
（3）
颈总动脉插管术：一般在左侧颈总动脉下穿双线，先结扎其远心端，近心端夹一动脉夹，结扎处与动脉夹之间的距离应达到3cm左右。然后在远离动脉夹2cm左右提起丝线，用眼科剪在近结扎处作一斜形切口，将准备好的已注满肝素的动脉插管由切口向心脏方向插人，用线将动脉与插管扎紧，并向两侧绕至插管的橡皮管上缚紧或在插管的侧管上缚紧，防止滑脱。注意插好后应保持插管与动脉的方向一致，避免插管口将动脉壁刺破。此时缓慢放开动脉夹，即可见血液冲入动脉插管，此时压力换能器有输出信号（或可见水银检测器波动）显示在示波器上。
（4）
颈外静脉插管术：将兔麻醉背位固定于手术台上，钝性分离颈外静脉并穿2条线备用。取长短适宜的静脉插管，插入端剪成斜面。另一端插入粗细适当的钝针头并连三通活塞，用肝素或生理盐水充满静脉插管的管腔，关闭活塞。用动脉夹夹住静脉近心端，待静脉充盈后结扎远心端。按动脉插管的方法在静脉上剪一斜形小口，插入导管，用备用线先打一个结，取下动脉夹，将导管送入所需长度（测量CVP时需要插入5～8cm），此时导管口在上腔静脉近右心房入口处。打好第二个结，将远心端结扎线绕导管打结固定，以防脱出。
3.
胸部手术：麻醉后动物背位固定，沿中线从胸骨切迹到剑突与脐之间的中点，切开皮下组织、浅筋膜、胸大肌、胸骨起点处的胸大肌筋膜以及腹白线，切口下段要暴露腹膜外脂肪。沿中线切开胸大肌筋膜及胸骨骨膜，剪开胸骨，可以用骨蜡塞紧骨髓腔以封闭粗糙的胸骨边缘并防止出血。打开胸腔，剪开心包膜，可见心脏搏动。
4.腹部手术。
（1）
膀胱插管导尿法：将兔麻醉背位固定于手术台上，剪去下腹部的毛并在耻骨联合前方，沿正中线作长约3～5cm的皮肤切口，沿腹白线剪开腹壁，打开腹腔并将膀胱移出腹腔外。在膀胱顶部做一个荷包缝合，在缝线中心作一小切口，插入膀胱插管，收紧缝线关闭其切口，并用380C热盐水纱布覆盖手术部位。膀胱插管通过橡皮管与记滴装置相连。
（2）
输尿管插管导尿法：手术方法同上，但切口要长一些约7cm，用手轻轻拉出膀胱且向下翻，暴露出膀胱三角，先仔细辨认清楚输尿管与膀胱的解剖关系，将输尿管与周围组织分离1cm左右。在膀胱底部找出双侧输尿管并穿线备用，在双侧输尿管近膀胱处分别用线进行结扎。在结扎上方各剪一小口，将充满生理盐水的输尿管插管向肾的方向分别插入输尿管，然后用线结扎固定且常可立即观察到有尿液从输尿管插管流出。手术完毕，用380C热盐水纱布覆盖手术部位，将两侧插管并在一起与记滴装置相连。
（3）
分离腹部的血管和神经：做腹正中切口长约10cm。腹腔的血管根部位置较深，多被腹腔脏器或其它结构复盖。腹腔的动脉发自腹主动脉，后者分为脏支和壁支。腹腔的静脉多与同名动脉伴行，分别注入下腔静脉系和门静脉系。静脉深浅不一，需要分层解剖。静脉呈蓝色能透过腹膜看见，是解剖动脉的良好标志。注意脏器的血管壁薄容易拉断，用力要适度。腹腔血管周围有内脏神经丛襻附在血管周围。在腹腔干根部两旁，小心清除疏松结缔组织，可见一对形状不规则，质地较硬的结构，即腹腔神经节。将腔内脏器轻推向左下方，暴露左侧肾脏，在肾脏右上方近中线处找到肾上腺。在其上方可见内脏大神经自膈肌下行入肾上腺，并分支入腹腔神经节。用玻璃分针提起内脏大神经向上轻拉，观察腹腔神经节是否随之活动，自活动处剥开结缔组织，分离出内脏大神经。
“注意事项”
1.
麻药注射速度应缓慢并密切观察。手术中动物出现尖叫、挣扎等兴奋现象，观察一段时间后仍然存在，说明麻醉过浅，补充麻药时一次补药量一般不超过总量的1/3并密切观察；若动物呼吸心跳骤停或全身青紫，呼吸减慢，可能是麻醉过量，应立即停止注射麻药，进行人工呼吸（或呼吸机）和用苏醒剂。
2.手术时一定要先看清楚各器官的解剖位置和毗邻关系及血管、神经的走向，手术操作应轻柔、快捷、准确。
3.手术过程中要注意止血。压迫止血法：用温热盐水纱布或棉球压迫止血，一般组织渗血可以解决；钳夹止血法：用止血钳尖端垂直对准出血点迅速、准确钳夹一会儿，松开后不再出血，一般小血管用此法：结扎止血法：较大的血管出血，应用血管钳夹住出血点，结扎止血。
4.实验后的家兔可通过静脉注入空气或急性放血等方法致死，处死后的动物放到指定地方并由专人处理。
“思考题”
为什么动物实验是生理学研究的主要方法？
